PCR實驗室的四個區域應注意正壓負壓控制
更新時間:2023-01-04
PCR實驗室又稱基因擴增實驗室,其特點是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學研究和實驗的常規方法,廣泛應用于生物學各個領域。例如:艾滋病檢測、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA指紋、個體識別、親子鑒定及法醫物證、動植物檢疫,動物及其衍生產品檢測,動物飼料、化妝品、食品衛生檢測,轉基因作物與轉基因微生物檢測等。
原則上分為四個區域:試劑準備區、樣品制備區、擴增區和擴增產物分析區。
PCR實驗室原則上為試劑準備區、樣品制備區、擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域并設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。
PCR實驗室區域的設置并不是一成不變的,以下幾種情況需要說明:
1.如果樣本在擴增之前需要粉碎處理,則需要增加一個區域用于樣品的粉碎。
2.如果采用實時熒光PCR法,則擴增區和分析區可以合并為一個區。
3.如果采用全自動化PCR分析儀,則標本制備區、擴增區和分析區可以合并為一個區。
四個區域注意正壓負壓的控制:
1.試劑準備區:
主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區,不得經過其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
對于氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求。
2.樣品制備區:
主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。
3.擴增區:
該區域的功能是DNA擴增和擴增片段的測定。此外,反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液和已制備的DNA模板(來自標本制備區)的加入等也可在本區內進行。對于氣流壓力的控制,相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
該區域的設備主要是核酸擴增熱循環儀、加樣器、超凈臺等。其中熱循環儀的電源應專用,并配備一個穩壓電源或UPS,以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響主要進行DNA擴增。
本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。
4.擴增產物分析區:
擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
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